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固相萃取仪如何操作呢?

2022-07-05 [363]
固相萃取仪的使用:
1.活化
固相萃取仪萃取前先用充满小柱的溶剂冲洗小柱或用5-10ml溶剂冲洗滤膜使SPE填料保持湿润,因为填料干燥会降低样品保留值,而各小柱的干燥程度不一,也会影响回收率的重现性。先用甲醇等水溶性有机溶剂冲洗填料,因为甲醇能润湿吸附剂表面,并渗透到非极性的硅胶键合相中,使硅胶更容易被水润湿;然后再加入水或缓冲液冲洗,创造和样品溶剂相容的环境并提高回收率。
2.上样
①用0.1mol/L酸或碱调节,使pH=9,离心取上层液萃取;
②用甲醇、乙腈等沉淀蛋白质后取上清液,以水或缓冲液稀释后萃取;
③用酸或无机盐沉淀蛋白质后取上清液,调节pH值后萃取;
④超声15min后加入水、缓冲液,取上清液萃取。流速应控制为1ml/min,流速快不利于待测物与固定相结合。
3.淋洗
反相SPE的清洗溶剂多为水或缓冲液,可在清洗液中加入少量有机溶剂、无机盐或调节pH值。加入小柱的清洗液应不超过一个小柱的容积,而SPE滤膜为5-10ml。
4.洗脱
应选用5-10ml离子强度较弱但能洗下待测物的洗脱溶剂。若需较高灵敏度,则可先将洗脱液挥干后,再用流动相重组残留物后进样。体内样品洗脱后多含有水,可选用冷冻干燥法。保留能力较弱的SPE填料可用小体积、较弱的洗脱液洗下待测物,再用极性较强的HPLC分析柱如C18柱分析洗脱物。